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在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域，支原體是一類引起感染的細菌，對人類和動物的健康構(gòu)成潛在威脅。在生物制品，細胞質(zhì)量相關(guān)項目中用到的生物藥，需要經(jīng)過支原體檢測，以保障臨床項目的安全。
在用qPCR的方法進行支原體檢測的時候，除了檢測類的試劑盒，還需要用到支原體標(biāo)準(zhǔn)品。本期內(nèi)容，我們來聊聊支原體檢測標(biāo)準(zhǔn)品的作用及意義，以及德國MB公司的三大類支原體檢測標(biāo)準(zhǔn)品的不同功能。
支原體標(biāo)準(zhǔn)品的作用
質(zhì)量控制
作為已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)，支原體標(biāo)準(zhǔn)品可用于驗證實驗室的分析方法的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。實驗室人員可以通過與標(biāo)準(zhǔn)品進行對比，及時發(fā)現(xiàn)潛在的誤差，從而提高支原體檢測的準(zhǔn)確性。
方法驗證
支原體標(biāo)準(zhǔn)品可用于驗證藥典中，支原體qPCR檢測方法。通過使用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，可以評估qPCR方法的敏感性、特異性和準(zhǔn)確性。
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德國MB支原體檢測標(biāo)準(zhǔn)品
靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品
歐洲藥典第2.6.7章（EP 2.6.7）和日本藥典第G3章（JP G3）詳細描述了用于支原體的核酸擴增技術(shù)（NAT）等檢測方法。如果將這些檢測方法用作傳統(tǒng)培養(yǎng)法的替代方法，在靈敏度方面，要求在樣品體積中每毫升檢測到10個菌落形成單位（CFU/ml）。
德國Minerva Biolabs公司的的10CFU靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品含有滅活支原體(10CFU標(biāo)準(zhǔn)品3管/盒)，用于評判實驗的靈敏度。
使用時重懸在感興趣的樣品基質(zhì)中(如EP 2.6.7 / JP G3)，用所應(yīng)用的方法進行陽性測試。大量實驗表明，核酸法檢測中，支原體DNA提取可以幫助實驗實現(xiàn)更高的靈敏度，提取后的10CFU提取物可直接用于PCR。
特異性標(biāo)準(zhǔn)品
德國MB公司生產(chǎn)的特異性標(biāo)準(zhǔn)品（1管支原體基因組DNA（≈10ng）+ 1管 Tris緩沖液（200μl）/盒）中，含有從目標(biāo)微生物中，以低培養(yǎng)傳代數(shù)提取的基因組DNA。用標(biāo)準(zhǔn)化的方法分析DNA起始物質(zhì)，以確定DNA的完整性和數(shù)量。最終的DNA提取部分測序，以確認物種的身份。
德國MB公司生產(chǎn)的特異性標(biāo)準(zhǔn)品，用于PCR和qPCR方法對支原體物種的特異性檢查。
PCR定量標(biāo)準(zhǔn)品
PCR定量標(biāo)準(zhǔn)包含從定義的微生物中提取的基因組DNA，在低培養(yǎng)傳代數(shù)。用標(biāo)準(zhǔn)化的方法分析DNA起始物質(zhì)，以確定DNA的完整性和數(shù)量。只有瓊脂糖凝膠中顯示> 10 kb條帶且OD260/280 > 1.8的純完整DNA才能用于制造這些產(chǎn)品。DNA被部分測序以確認物種的身份。
德國MB公司的PCR定量標(biāo)準(zhǔn)包含目標(biāo)微生物基因組拷貝的制定數(shù)量。因此，德國MB公司的定量標(biāo)準(zhǔn)品非常適合在qPCR中生成DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線。
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