在很多課題中，細(xì)胞實驗都是*的。除了之前我們介紹的細(xì)胞復(fù)蘇、傳代和凍存這“基礎(chǔ)三件套"之外，還有許多常見的操作，需要我們了解甚至是熟練掌握。

今天我們就來盤點一下，那些助力高分文章發(fā)表的細(xì)胞實驗技術(shù)（第一期）。

細(xì)胞增殖實驗

MTT法：又稱MTT比色法，是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。

檢測原理：

活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲臜，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。

用途：廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。

特點：靈敏度高、經(jīng)濟。

CCK-8法：又稱細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性實驗。

檢測原理：

該試劑中含有WST-8，在電子載體1-Methoxy PMS的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan dye）。生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細(xì)胞增殖和毒性分析。

用途：廣泛用于藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗等。

特點：對細(xì)胞毒性小，可以多次測定選取最佳測定時間；檢測迅速；靈敏度高。

BrdU法：直接測定進行分裂的細(xì)胞數(shù)來評價細(xì)胞增殖能力。

檢測原理：

用BrdU預(yù)處理的細(xì)胞中，BrdU可代替胸腺嘧啶核苷插入復(fù)制的DNA雙鏈中，而且這種置換可以穩(wěn)定存在，并帶到子代細(xì)胞中。細(xì)胞經(jīng)過固定和變性處理后，可用免疫學(xué)方法檢測DNA中BrdU的含量(如采用鼠抗BrdU單克隆抗體特異識別BrdU,再采用辣根過氧化酶標(biāo)記的山羊抗鼠IgG二抗標(biāo)記，最后用比色法或熒光的方法進行定量測定)，從而判斷細(xì)胞的增殖能力。

用途：可判斷增殖細(xì)胞的種類，增殖速度，對研究細(xì)胞動力學(xué)有重要意義。

特點：簡單、快速、安全，檢測的敏感性好；適合于大塊組織的快速檢查，尤適于定量研究；BrdU既可用于活體標(biāo)記，亦可用于細(xì)胞或組織細(xì)胞增殖、分化的標(biāo)記。副作用低；此方法的缺點是標(biāo)記時間較短。

EDU法：檢測細(xì)胞增殖的方法。

檢測原理：

EdU是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細(xì)胞增殖時期代替T滲入正在復(fù)制的DNA分子，通過基于EdU與熒光染料的特異性反應(yīng)檢測DNA復(fù)制活性，通過檢測EdU標(biāo)記便能準(zhǔn)確地反映細(xì)胞的增殖情況。與BrdU檢測方法相比，EdU檢測方法更快速、更靈敏、更準(zhǔn)確。EdU檢測染料只有BrdU抗體大小的1/500，在細(xì)胞內(nèi)很容易擴散，無需DNA變性（酸解、熱解、酶解等）即可有效檢測，可有效避免樣品損傷，在細(xì)胞和組織水平能更準(zhǔn)確地反映細(xì)胞增殖等現(xiàn)象。

用途：在細(xì)胞水平上EdU對增殖細(xì)胞的標(biāo)記，對植物增殖細(xì)胞進行標(biāo)記并檢測、細(xì)胞示蹤實驗等。

特點：EdU法檢測細(xì)胞增殖，無需抗體，無變性步驟，保持細(xì)胞形態(tài)和DNA完整性。

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