在疫苗生產(chǎn)、生物制藥和細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)中，支原體污染的預(yù)防和祛除，是保證生產(chǎn)質(zhì)量和實(shí)驗(yàn)順利的重要環(huán)節(jié)。

在全qiu支原體檢測和祛除領(lǐng)域中，近二十年一直排名*的，是一家位于德國柏林郊外的生物廠家——德國Minerva Biolabs公司（簡稱德國MB）。

全qiu眾多的大型生物藥廠以及數(shù)不過來的生物實(shí)驗(yàn)室，大部分預(yù)防、檢測，祛除支原體的產(chǎn)品，均都來自于這家MB公司。

在之前的文章中，我們已經(jīng)為大家介紹了MB家族全套的『支原體檢測產(chǎn)品系列』，其中包括熒光定量PCR方法的檢測試劑盒，以及可做方法學(xué)驗(yàn)證的標(biāo)準(zhǔn)品等。

而本期文章，我們將把MB品牌的『支原體祛除和預(yù)防系列』產(chǎn)品，簡明扼要地介紹給大家，希望對(duì)疫苗生產(chǎn)、生物制藥、細(xì)胞治療、CAR-T等項(xiàng)目的質(zhì)檢質(zhì)控，以及更多實(shí)驗(yàn)室的科研工作者，能有所幫助。

本文共分三個(gè)部分：

一，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，可加入培養(yǎng)基中的支原體清除劑。

二，工作區(qū)域中支原體污染的清除系列，同時(shí)對(duì)細(xì)菌、病毒、真菌、霉菌都有效。

三，預(yù)防培養(yǎng)箱水槽、水浴鍋中水，不被支原體污染，同時(shí)對(duì)霉菌，孢子，細(xì)菌，真菌都有效的產(chǎn)品系列。

一，細(xì)胞中支原體的祛除

（一）Zell Shield^®支原體祛除劑（培養(yǎng)基用）

1. 適用范圍

（1）細(xì)胞已發(fā)生支原體污染，但又不愿丟棄，希望繼續(xù)培養(yǎng)（如已轉(zhuǎn)染或大量擴(kuò)增的細(xì)胞）。

（2）初始培養(yǎng)的原代細(xì)胞。

（3）存在支原體污染高風(fēng)險(xiǎn)的細(xì)胞。

2. 用法：

（1）1:100加入培養(yǎng)基。

（2）當(dāng)細(xì)胞存在支原體污染時(shí)，應(yīng)先對(duì)細(xì)胞懸浮沖洗三次，再用含Zell Shield®培養(yǎng)基培養(yǎng)。每次傳代前都應(yīng)做懸浮沖洗處理。連續(xù)傳代4次，支原體即可祛除。

（二）Mynox^® Gold支原體祛除劑（珍貴細(xì)胞保種用）

1. 適用范圍

被支原體污染的珍貴細(xì)胞或不易獲得的生物樣本（如細(xì)胞種子）。

2. 用法：

步驟1. 將「*治療液」加入到4.5ml培養(yǎng)基（FBS需≤5%）中，培養(yǎng)細(xì)胞（細(xì)胞數(shù)為104~105）。

步驟2. 細(xì)胞長至80%-90%匯合時(shí)，細(xì)胞傳代。將1管「鞏固防護(hù)液」加到9.5ml培養(yǎng)基中，用該培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

步驟3. 重復(fù)步驟2，細(xì)胞再傳代2次，支原體即*祛除。

注意：每次傳代時(shí)，hao都能把細(xì)胞懸浮沖洗三次，可取得更好的治療效果。

（三）Mynox^®支原體祛除劑（珍貴樣本用）

1. 適用范圍

被支原體污染的珍貴細(xì)胞、不易獲得的生物樣本或病毒收獲液（特別是不能長期培養(yǎng)的樣品）。

2. 用法：

（1）對(duì)于貼壁細(xì)胞：

步驟1. 培養(yǎng)皿中加入200μl Mynox®和 2.8ml培養(yǎng)基中（FBS≤5%），混勻。

步驟2. 再加入2ml細(xì)胞（細(xì)胞數(shù)為104~105，培養(yǎng)基中的FBS需≤5%）。

步驟3. 細(xì)胞培養(yǎng)2小時(shí)，棄上清，換用新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)4代即可。

（2）對(duì)于懸浮細(xì)胞：

步驟1. 在離心管中加入200μl Mynox®和1.6ml胰酶（0.125 %，5 mM EDTA in PBS），混勻。

步驟2. 加入1.6ml細(xì)胞（細(xì)胞數(shù)為104~105）。

步驟3. 室溫靜置30min。

步驟4. 600×g離心5min。棄上清，換用新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)4代即可。

二，工作區(qū)域中支原體的祛除

（一）MB支原體祛除噴霧

英文名: Mycoplasma-Off^TM

1. 用途：實(shí)驗(yàn)環(huán)境（如實(shí)驗(yàn)臺(tái)、超凈臺(tái)、培養(yǎng)箱、儀器設(shè)備）、無菌車間和潔凈生產(chǎn)線的支原體的祛除，對(duì)清除支原體、細(xì)菌、真菌（含真菌孢子）和多種病毒污染均有效。

2. 用法：噴霧劑噴灑待消毒的表面，等待5-10min后，用干凈紙巾擦拭。通風(fēng)2-3分鐘。

（二）MB支原體祛除濕巾

英文名：Mycoplasma-Off^TM Wipes

1. 用途：應(yīng)用于電子設(shè)備、門把手、電話、移液器表面的支原體的祛除，對(duì)支原體、細(xì)菌、真菌（含真菌孢子）和多種病毒均有效。

2. 用法：用濕巾擦拭后，應(yīng)讓被消毒物體的表面保持濕潤，再讓其自然風(fēng)干。

三，培養(yǎng)箱水槽、水浴鍋中支原體的預(yù)防

支原體祛除劑（水槽用）

英文名：Water Shield^TM

1. 用途：預(yù)防培養(yǎng)箱水槽、水浴鍋的支原體、細(xì)菌和真菌污染。

2. 用法：

步驟1. 本品按1:200比例加入到蒸餾水中，如1L蒸餾水+5ml Water Shield^TM

步驟2. 加入Water Shield^TM的蒸餾水可直接加入到培養(yǎng)箱水槽或水浴鍋中，

步驟3. 4周左右清洗水槽，換水，重新加入Water Shield^TM。

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