為什么有些細胞實驗無法重復(fù)？

為什么有的細胞在相當(dāng)長的時間里，都養(yǎng)不到好狀態(tài)？

為什么實驗室中，超過一株以上的細胞都時好時壞？

細胞生長緩慢、細胞變形、碎片增加、懸浮細胞容易成團、培養(yǎng)基提前變色、鏡下發(fā)現(xiàn)有小黑點……

如果排除了其他試劑選擇不當(dāng)、細胞株老化、細菌污染等原因，而仍有上述一種或幾種情況，則高度提示——你的細胞可能被支原體污染了！

圖. 電鏡下的支原體

支原體污染普遍存在

據(jù)美國數(shù)據(jù)統(tǒng)計，細胞發(fā)生支原體污染的幾率在70%以上。同時，由于支原體直徑很小，僅在180nm~350nm之間，只有通過電鏡才能看到，不易被實驗者肉眼發(fā)覺，支原體污染逐漸成為一個普遍存在的問題。

支原體污染的危害

支原體污染是個循序的過程，普通抗生素對其無效。因此，支原體污染有多煩人，相信實驗人都領(lǐng)教過了。

1、細胞狀態(tài)不佳，生長速度慢，實驗無法推進。

2、細胞內(nèi)DNA、RNA及蛋白表達發(fā)生改變，影響實驗結(jié)果，導(dǎo)致實驗數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確，時間、經(jīng)費的浪費。

3、一株污染的細胞成為實驗室的污染源，對工作區(qū)域以及培養(yǎng)箱和液氮罐造成污染，進而污染其他細胞，導(dǎo)致其他細胞繼發(fā)性污染，實驗受影響，數(shù)據(jù)無法重復(fù)，預(yù)期結(jié)果出不來。

如何有效把支原體趕出細胞？

對于已耗費很多時間、大量擴增起來的細胞，或經(jīng)過基因轉(zhuǎn)染、體外刺激等大量工作處理過的細胞，如果發(fā)現(xiàn)細胞被支原體污染了，怎么辦？由于前期工作量巨大，我們無法丟棄已有細胞。但由于價格原因，又無法使用那些昂貴試劑殺除細胞上的支原體，同時，實驗人員還需要清除細胞上的支原體污染，讓實驗得以往下推進，以終獲得準(zhǔn)確的實驗數(shù)據(jù)。

實驗者可選用對支原體*的抑制劑，通過對細胞的前期處理，中期加藥，逐步通過4代左右的培養(yǎng)，從而將支原體污染*清除，確保試驗順利推進，結(jié)果準(zhǔn)確。*此類試劑眾多，締一生物生物周圍的實驗人做過很多嘗試，其中效果確切且性價比很高的當(dāng)屬德國Minerva公司的ZellShield®祛除劑。

Zell Shield®是一種即用型新型復(fù)合抗生素，副作用極低，能有效地祛除細胞培養(yǎng)支原體、細菌、真菌污染。Zell Shield®使用方法簡單，直接加入培養(yǎng)基中保護細胞。

它的原理：通過抑制支原體增殖中某種蛋白的合成，達到抑制新的支原體增殖的目的。屬復(fù)合型的新型抗生素。它廣泛適用于細胞培養(yǎng)相關(guān)的科研和工業(yè)領(lǐng)域。

特點

1、適用范圍廣

普通細胞培養(yǎng)和原代細胞培養(yǎng)

2、無細胞毒性

目前，Zell Shield®對多種細胞系都無細胞毒性。

3、高效廣譜

祛除支原體效果明顯，同時對細胞內(nèi)和細胞外的革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌、病原蟲、真菌等污染亦可有效預(yù)防。

4、操作簡便

可直接加入到預(yù)處理的培養(yǎng)基或細胞中進行消毒。

5、穩(wěn)定性高

在細胞孵育期內(nèi)，Zell Shield®始終保持穩(wěn)定的活性。

6、低耐藥風(fēng)險

精心挑選的新型復(fù)合抗生素只有極低的耐藥風(fēng)險，多種抗生素聯(lián)合使用幾乎不會產(chǎn)生耐藥突變株。

操作步驟：

第1步：研究發(fā)現(xiàn)，98%的支原體污染發(fā)生在細胞間隙。因此，首先要把細胞消化下來，放入離心管，懸浮沖洗，離心，棄上清，反復(fù)三次。此時可將細胞上大部分的支原體去除，為進一步加藥抑制做好準(zhǔn)備。

第二步：培養(yǎng)液中加入1%的ZellShield®，細胞進行正常培養(yǎng)。新的支原體增殖受到抑制，舊的支原體隨著細胞的換液逐步減少，通過4代左右的培養(yǎng)，細胞中的支原體基本可被*清除。

注：使用ZellShield®時，不需使用鏈青霉素。

此試劑價格約2200元/50ml，可保證大量細胞的實驗得以順利推進。

總之，細胞培養(yǎng)中，支原體污染發(fā)生頻繁。有時帶來的危害會造成實驗的巨大損失。應(yīng)經(jīng)常檢測和及時排除支原體污染，讓細胞在健康安全的環(huán)境下生長，為獲得準(zhǔn)確的實驗結(jié)果，打下良好的基礎(chǔ)。